Estudo da expressão de um recetor da progesterona nas populações "major" linfocitárias

Dissertação de mestrado em Bioquímica, apresentada ao Departamento de Ciências da Vida da Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade de Coimbra.O interesse pelo estudo dos mecanismos biológicos que estão na base de uma gravidez surge do conhecimento da presença de uma tolerância imunológica entre o feto e a mãe durante a gestação e que se designa por ‘paradoxo imunológico’. O feto é considerado um semienxerto por possuir antigénios de origem materna e paterna e teoricamente dever-se-ia verificar uma resposta de rejeição, como ocorre normalmente em tecidos transplantados entre indivíduos geneticamente diferentes (Sarafana & Coelho 2007)(Christiansen 2013). Esta não rejeição, poderá estar relacionada com três fatores importantes para o normal desenvolvimento da gravidez: separação anatómica entre feto e mãe, imaturidade antigénica do feto e, modulação da resposta imunológica por parte da mãe, o que leva à aceitação do feto (Erlebacher 2013)(Sarafana & Coelho 2007)(Arosa et al. 2012). Existe assim, uma lacuna nos mecanismos que operam na tolerância fetomaterna durante a gravidez (Hemberger 2013)(Lashley et al. 2011)(Mendelson 2009)(Kobayashi 2012). Durante a gravidez parece também haver uma diminuição da resposta imunitária celular, o que se traduz habitualmente pelo aumento da suscetibilidade da mãe a infeções. Esta modificação do sistema imunitário materno, também pode estar relacionada com a apresentação local de antigénios paternos por moléculas apresentadoras de antigénios e imunização sistémica devido à fuga de células fetais para a corrente sanguínea materna (microquimerismo) (Hemberger 2013)(Lashley et al. 2011)(Mendelson 2009)(Kobayashi 2012). Relativamente ao trabalho de parto, que é caraterizado pelo amadurecimento cervical; rotura de membranas; contrações uterinas e subsequente expulsão do feto, é atualmente aceite a intervenção da resposta inflamatória (Romero et al. 2006) (A Pařízek et al. 2013)(Norman et al. 2007). Esta explicação assenta em dados científicos como o aumento da concentração de citocinas proinflamatórias e de células do sistema imunitário em diversos componentes do sistema reprodutivo: líquido amniótico, miométrio, cérvix e membranas fetais (Byrns 2013)(Mendelson 2009). Por sua vez a quiescência uterinadurante a maior parte da gravidez parece ser mantida por ações anti-inflamatórias, como a progesterona através dos seus recetores e indução de citocinas igualmente anti-inflamatórias (Hemberger 2013)(Norman et al. 2007). Todavia, todo o mecanismo está ainda por esclarecer. A progesterona tem um papel fundamental para a manutenção da gravidez mantendo assim a quiescência uterina. Descobertas recentes mostram que, a progesterona não só exerce efeitos genomicamente através da sua ligação a recetores nucleares da progesterona (nPR), mas também exerce os seus efeitos por vias não genómicas, ligando-se a recetores membranares (mPRs), que parecem encontrar-se na superfície celular (Zachariades et al. 2012)(Mesiano et al. 2011)(Kelder et al. 2010)(Fernandes et al. 2005). Este estudo pretende clarificar alguns fatores que estão envolvidos na manutenção da gravidez e também no desencadear do trabalho de parto, e avaliar a expressão de um tipo de receptor membranar em células do sistema imune, e que estará sob a influência da ação molecular da progesterona, em mulheres grávidas. Neste sentido, tem-se como objetivos principais: (1) caracterizar fenotipicamente as populações linfocitárias major e subpopulações na gravidez normal no segundo, terceiro trimestre e parto, através da avaliação da variação destas populações ao longo da gravidez e dia do parto e (2) avaliar a expressão do recetor mPR-α nestas populações linfocitárias e estudar a sua variação ao longo da gravidez e dia do parto.Com a realização deste estudo pode-se concluir que, (1) todas as células do sistema imunológico sofrem alterações na gravidez na tentativa de criar um ambiente imuno-tolerante, permitindo a quiescência uterina e assim aceitação do feto; (2) inovador pelo facto de demonstrar que existe expressão do recetor mPR-α nas populações major linfocitárias de sangue periférico, e não só nos linfócitos T; (3) existe uma imunomodelação da expressão do recetor mPR-α ao longo da gravidez, estando assim dependente das células do sistema imunitário e das hormonas libertadas durante a gravidez, mais propiamente, a progesterona e; (4) poderá vir a ser uma mais-valia à compreensão dos processos envolvidos durante a gravidez e em processos patológicos decorrentes de uma gravidez.Interest in the immunology of pregnancy was originally inspired by the realization that expression of paternal histocompatibility antigens by the fetus and placenta should provoke the same kind of tissue rejection response seen following organ transplantationnamede by “immunological paradox of pregnancy” (Erlebacher 2013). It is still not elucidated how the fetus considered a semiallogenic graft in most instances avoids rejection by the maternal immune system. There are several mechanisms to explain this: one of his explanations is based on a diminished maternal responsiveness to pregnancy, leading to acceptance of the foreign fetus (Erlebacher 2013)(Sarafana & Coelho 2007)(Arosa et al. 2012). Indeed, the cellular immune response seems to be decreased during pregnancy, reflected by the increased susceptibility to viral infections and specific intracellular pathogens(Hemberger 2013)(Lashley et al. 2011)(Mendelson 2009)(Kobayashi 2012). Parturition is widely accepted to be an inflammatory event, as it is largely driven by inflammatory cytokine and prostaglandin signaling. Inflammatory pathways stimulate the various events that lead to parturition, such as cervical ripening, rupture of membranes, and uterine contractions (Romero et al. 2006)(A Pařízek et al. 2013)(Norman et al. 2007) and inflammation and activation of proinflammatory cytokines has been implicated in the mechanisms responsible for term parturition. However, all this mechanisms are yet unknown (Byrns 2013)(Mendelson 2009). Progesterone plays a central role in the establishment and maintenance of human pregnancy, and many rapid effects of this hormone have been observed. These results demonstrate that progesterone can exert effects in a nongenomic manner and not only in a genomic manner, binding to membrane receptors. This genomic manner was recognised by the progesterone binding to nuclear progesterone receptors, which is relatively slow than genomic pathway, where progesterone binds to membrane receptors (Zachariades et al. 2012)(Mesiano et al. 2011)(Kelder et al. 2010)(Fernandes et al. 2005).The main idea of this study is to understand the mechanism behind maintenance of pregnancy, and what induce the process of parturition. Moreover, we had study the relationship between immune system cells and the expression of the new membrane progesterone receptor on these cells, on pregnant women. So the main goals of this study were: (1) immunophennotiping the major immune system cells during pregnancy (second and third trimester and delivery day); (2) immunophennotiping the expression of membrane progesterone receptor alpha (mPR-α) on the major immune system cells also during pregnancy. In conclusion, we were capable to see: (1) changes on the immune system cells profile during the pregnancy, to maintain an immune tolerance; (2) the expression of membrane progesterone receptor alpha (mPR-α) on the immune system cells and his relationship with and; (3) an immune modulation between membrane progesterone receptor alpha (mPR-α) and immune system cells and progesterone. To this end, a comprehensive and detailed understanding of the mechanisms involved in pregnancy, not only to develop more effective therapies for treatment of pregnancy complications and prevention of this pathologies, but also to elucidate the complex process behind the pregnancy